林蛙皮中多糖提取方法的比较

  中国林蛙（Rana chensinensis David）又名蛤什蟆，属两栖纲、无尾目、蛙科、蛙属，是集药用、食补、美容功能于一体的珍稀两栖类动物，具有很高的应用价值和开发潜力。
本文以东北林蛙皮为实验材料，以多糖的提取率为考察指标，将林蛙皮粉碎，过筛，活性炭脱腥，比较热水提取法、碱提取法、酶提取法三种不同提取方法的提取效果，并用苯酚-硫酸法测定多糖含量。实验结果表明，酶法提取效果最佳，其次是热水提取法和碱提取法。采用正交试验法对酶法提取多糖的工艺进行优化，得出其最佳提取工艺条件为：酶用量2%，胃蛋白酶与胰蛋白酶比2:1，提取温度50℃，提取时间7h，多糖提取率为0.91%。
关键词：林蛙皮；多糖；酶法；正交试验
目 录
摘 要 1
Abstract 1
目 录 2
第一章 前 言 4
第二章 文献综述 5
2.1 中国林蛙 5
2.1.1 中国林蛙的特征 5
2.1.2 林蛙的功能作用 6
2.1.3 林蛙的国内外研究现状 7
2.2林蛙皮 7
2.2.1林蛙皮的功能 7
2.2.2 林蛙皮研究现状和应用前景 10
2.3多糖 11
2.3.1 多糖的概念 11
2.3.2多糖的结构 12
2.3.3 多糖的功效 12
2.3.4 多糖的分离提纯方法概述 12
第三章 实验部分 14
3.1材料与设备 14
3.1.1原材料 14
3.1.2主要仪器 14
3.1.3主要试剂 14
3.2蛙皮多糖含量的测定 15
3.2.1 苯酚-硫酸法测定蛙皮多糖的含量 15
3.2.2 多糖提取率的计算 15
3.3 林蛙皮多糖提取方法的比较 15
3.3.1 热回流法提取蛙皮多糖 15
3.3.2 酶法提取蛙皮多糖 16
3.3.3 碱法 18
3.4 正交实验法优化蛙皮多糖的提取工艺 19
3.5 结果与讨论 20
3.5.1葡萄糖标准曲线的绘制 20
3.5.2单因素实验结果分析 21
3.5.3 正交试验优化蛙皮多糖提取工艺结果分析 25
第四章 结论与展望 28
4.1 结论 28
4.2 展望 28
致 谢 29
参考文献 30
目前国内外对林蛙的研究主要集中在胶原蛋白这一块，对林蛙多糖的研究较少，其实动物多糖在降血压，增强免疫，抗肿瘤这些方面有很好的疗效，—些动物多糖具有排除肠道毒素和降低重金属对人体的毒害、抗辐射、防龋齿等方面的保健作用。另外，壳聚糖含有游离氨基显碱性，在胃里能中和胃酸，形成一层保护膜，可辅助治疗胃酸过多症和预防消化性胃溃疡；透明质酸具有保持皮肤弹性的功能，还能保留大量水分子，对皮肤具有保湿作用[8]。
本论文的研究内容主要包括两部分：第一部分是酶法，碱法[9]，热水浸提法[10]林蛙皮中多糖的方法叙述；第二部分优化比较最佳工艺。
实验部分
3.1材料与设备
3.1.1原材料
林蛙皮粉：林蛙晒干，剥下林蛙皮，用粉碎机粉碎。
3.1.2主要仪器
（1）TDZ5-WS型离心机，江苏金坛荣华仪器制造有限公司；
（2）GYB30－6D型高压均质机，上海东华高压均质机厂；
（3）HV-10电子天平，梅特勒-托利多仪器有限公司；
（4）UV1102型紫外分光光度仪，上海天美科学仪器公司；
（5）DK-98-Ⅰ型电子恒温水浴锅，天津市泰斯特仪器有限公司；
（6）FD-1C型冷冻干燥机，北京德天佑科技有限公司；
（7）RE-52C旋转蒸发器，上海亚荣生化仪器厂；
（8）KQ-250DB型超声波清洗器，昆山市超声波仪器有限公司；
3.1.3主要试剂
（1）浓盐酸，分析纯，北京试剂厂；
（2）浓硫酸，分析纯，北京试剂厂；
（3）95%乙醇，分析纯，北京试剂厂；
（4）氢氧化钠，分析纯，北京试剂厂；
（5）氯胺T ，分析纯，北京试剂厂；
（6）胃蛋白酶，分析纯，北京试剂厂；
（7）醋酸钠 ，分析纯，北京试剂厂；
（8）活性炭，北京试剂厂；
（9）硝酸，分析纯，沈阳市试剂五厂；
（10）对苯二酚，分析纯，沈阳市试剂五厂；
（11）亚硫酸钠，分析纯，沈阳市试剂五厂；
（12）磷酸二氢钾，分析纯，北京试剂厂；
（13）高氯酸，分析纯，北京试剂厂；
（14）二甲氨基苯甲醛，分析纯，沈阳市试剂五厂；
（15）异丙醇，分析纯，北京试剂厂；
3.2蛙皮多糖含量的测定
3.2.1 苯酚-硫酸法测定蛙皮多糖的含量
采用苯酚-硫酸法测定蛙皮多糖的含量，具体操作步骤如下：精确称取干燥的葡萄糖0.1g，准确定溶至1000mL容量瓶。精密吸取葡萄糖标准溶液0、0. 2、0.4、0. 6、0.8、1.0mL。再加入蒸馏水至1mL, 迅速加入苯酚1mL, 硫酸5mL 后摇匀, 静止5min, 置沸水浴中加热15 min，取出迅速冷却至室温。用分光光度计在490 nm 波长下测定吸光度值。并且以吸光度值y为纵坐标、溶液中葡萄糖浓度x为横坐标，绘制标准曲线。